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淋巴細(xì)胞分離液操作規(guī)范

       為確保淋巴細(xì)胞分離液的有效使用,保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和操作人員的安全,以下列出淋巴細(xì)胞分離液的基本操作規(guī)范:
       1、樣本準(zhǔn)備:使用新鮮抗凝全血,抗凝劑可選EDTA、枸櫞酸鈉或肝素。將血液樣本與等體積的生理鹽水或PBS稀釋,以減小紅細(xì)胞凝集,提高分離效果。
       2、分離液使用:將淋巴細(xì)胞分離液恢復(fù)至室溫后,輕輕搖勻。根據(jù)樣本體積,在離心管中加入適量的分離液(通常為樣本體積的1-2倍)。注意,分離液與樣本的總體積不應(yīng)過離心管容量的三分之二。
       3、樣本加樣:使用移液管或巴氏吸管,將稀釋后的血液樣本緩慢加至分離液上層,避免兩者混合,形成清晰的分層界面。
       4、離心操作:在室溫下,以適當(dāng)?shù)碾x心力(如500-1000g)離心20-30分鐘。離心過程中,紅細(xì)胞和粒細(xì)胞會(huì)沉降到底部,淋巴細(xì)胞則聚集在分離液與血漿的界面處,形成一層白膜。
       5、細(xì)胞收集:離心結(jié)束后,小心吸取白膜層至新的離心管中,避免混入紅細(xì)胞和分離液。隨后,用生理鹽水或PBS洗滌細(xì)胞,去除殘留的分離液和血小板。
       6、后續(xù)處理:洗滌后的淋巴細(xì)胞可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)或其他處理。注意在整個(gè)操作過程中保持無菌,避免細(xì)胞污染。
2025/04/03 14:21:38 95 次

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